MiR-217对乳腺癌上皮细胞甲基化关键基因调控作用的研究

【摘要】目的：探讨在人乳腺癌上皮细胞系中，miR-217通过直接作用于DNMT1与EZH23′UTR调控DNMT1及EZH2转录后表达水平，为后期动物实验和临床试验提供实验基础。方法：首先利用实时定量PCR技术，检测HBL-100、MCF-7和MDA-MB-231三株人乳腺上皮细胞系中miR-217和EZH2转录后表达水平；利用Westernblot技术检测三株细胞系中EZH2蛋白表达水平；筛选用于“过表达、抑制miR-217实验”的细胞。然后利用瞬时转染技术，在低表达miR-217细胞中，转染miR-217模拟物；在高表达miR-217细胞中，转染miR-217抑制物，进行miR-217的过表达、抑制实验。最后，将含有miR-217野生型及突变型识别位点的DNMT1及EZH23′UTR质粒载体，分别转染293T细胞，检测其相对荧光素酶活性的改变。结果：RT-PCR结果显示，与正常乳腺上皮细胞系HBL-100比较，EZH2在乳腺癌上皮细胞系MCF-7和MDA-MB-231中显著高表达(P<0.05)；而miR-217显著低表达(P<0.05)。Westernblot检测结果显示，EZH2在正常乳腺上皮细胞系HBL-100中低表达，乳腺癌上皮细胞系MCF-7、MDA-MB-231中高表达。三阴性乳腺癌上皮细胞系MDA-MB-231中过表达miR-217，DNMT1和EZH2蛋白表达下降；乳腺上皮细胞系HBL-100中抑制miR-217表达，DNMT1和EZH2蛋白表达增高。293T细胞中检测海肾和荧火虫两种荧光素酶活性，双荧光素酶检测结果显示，DNMT1-UTR-WT的相对荧光素酶活性显著低于DNMT1-UTR-MUT(P<0.05)，具有统计学意义；EZH2-UTR-WT的相对荧光素酶活性显著低于EZH2-UTR-MUT(P<0.05)，具有统计学意义。结论：在人乳腺癌上皮细胞系中，miR-217下调DNMT1及EZH2蛋白表达，且通过直接作用于DNMT1、EZH23′UTR下调其表达。
【作者】王璐璐；
【导师】冯景；
【作者基本信息】苏州大学，临床检验诊断学，2014，硕士
【关键词】miR-217；DNMT1基因；EZH2基因；HBL-100；MCF-7；MDA-MB-231；

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